南宫28大鼠肺泡巨噬细胞NR8383培养说明书

一、细胞培养条件

  细胞名称：大鼠肺泡巨噬细胞NR8383
  生长特性：贴壁、悬浮混合生长
  冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）
  培养体系：F12K + 20% FBS + 1% P/S
  传代方法：第一次建议1:2传代，传代情况：2天换液
  备注：悬浮细胞离心收集，贴壁细胞按贴壁方法处理，用无菌离心管收集培养基，留作过渡培养。

二、细胞收到后处理

  培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是运输细胞的最佳方法。收到细胞后，使用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后在超净台内进行严格的无菌操作，将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续处理。观察细胞生长情况并拍照保存（建议40x、100x、200x倍各一张），前三天的照片为重要售后依据，若未提供照片则默认为收到状态良好。对于传代后，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基，以便进行对比培养，换液后请松开瓶盖。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代：如未超过80%汇合度，将瓶装的完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基于37℃、5% CO2孵箱培养；若细胞密度超80%，即可进行传代培养。

1. 对于贴壁细胞：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后观察细胞消化情况；若细胞大部分变圆并脱落，迅速回到操作台，轻敲培养瓶并加5ml以上完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 根据1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

2. 对于悬浮细胞：

1. 方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2ml培养液后吹匀，将细胞悬液按1:2比例分至新的含有8ml完全培养基的新瓶中。
2. 方法二：可选择半数换液方式，弃去一半培养基后，将剩余细胞悬起，按1:2比例分至新的含有8ml完全培养基新瓶中。

b. 细胞冻存：

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，注意监测细胞状态，细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打使细胞脱落，悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，加入1ml南宫28无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，若后期需转入液氮罐中，需在-80℃冰箱中存放24小时以上再转入液氮罐。

c. 细胞复苏：

1. 从液氮中取出细胞冻存管（请佩戴防护面具），快速将其置于37℃水浴中解冻，直至冻存管中无冰晶后，使用75%的酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含有5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清后，加5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，并放入37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养；第二天更换新鲜完全培养基。

四、注意事项

  部分细胞贴壁不牢，运输过程中可能会发生脱落现象，这是正常现象。如脱落较多，请将培养瓶的培养液收集至离心管，进行离心后收集上清作过渡培养，后续可进行对比培养。根据所需步骤再进行其他处理。

五、售后条款

1.) 细胞出现问题，可重发的情况：

1. 运输途中因细胞丢失、瓶身破损、培养液泄漏等问题，提供相关证明可重发。
2. 收到细胞后48小时内发现污染情况，并提供真实实验结果可重发。
3. 对于常温发货的细胞及干冰冻存发货的细胞，若细胞状态未达标准并提供实际照片，视情况重发。
4. 如细胞生长后出现问题并提供近期的照片及详细实验步骤，技术人员将判断责任并决定重发。

2.) 细胞出现问题，不予重发的情况：

1. 客户造成的污染问题，无法重发。
2. 不正当操作导致的细胞状态不佳，无法重发。
3. 使用推荐以外的培养体系，无法重发。
4. 未提供培养前3天的照片，无法重发。
5. 进行其他处理的细胞，无法重发。

  我们推荐使用南宫28品牌提供的培养体系，以确保细胞的健康生长和复苏效果。